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CCK-8試劑盒產(chǎn)品用途和基本原理說明
點擊次數(shù):2510 更新時間:2020-06-25
   CCK-8試劑盒是一種基于WST-8(化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。
  CCK-8試劑盒產(chǎn)品用途
  用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。
  CCK-8試劑盒基本原理
  該試劑中含有 WST-8【化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2 H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體 1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*(1-Methoxy PMS)的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。
  CCK-8試劑盒的使用及保存方法分享
  1. 未開封的試劑盒:所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請注意,收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液,終止液保存于4℃,其他試劑保存于-20℃。
  2. 使用后的試劑盒:剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存,開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。
  注意:
  試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸,按實驗需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在*實驗后 1個月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn),保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。
  標(biāo)本的采集與保存
  1. 血清:
  將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜,然后 1000×g 離心 20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
  2. 血漿:
  用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
  3. 組織勻漿:
  1) 取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
  2) 可同時選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨,該過程需在冰上進(jìn)行(有條件實驗室可選用機(jī)器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融 進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2次)。
  3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,留取上清即可檢測。

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號

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